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荧光定量PCR是生命科学领域的一项重要技术
更新时间:2015-07-27 点击次数:1181次
  荧光定量PCR技术,是通过在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,对起始模板进行定量分析的方法。实验采用两种定量方式,即定量和相对定量。荧光定量PCR可用于mRNA表达量水平检测、MicroRNA表达量水平检测和基因拷贝数检测。实验的方法可分为SYBRGreenI法和TaqMan探针法。
  
  荧光定量PCR就是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。由于荧光定量PCR的众多优点,现在已经是生命科学领域的一项重要技术,并成为基因表达差异和文章发表*的部分。荧光定量PCR输出的数据不同于常规PCR电泳检测,很多没有做过荧光定量PCR的研究者常常感到高深莫测,不知从何入手;甚至一些做过一些实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑。很多时候,尽管知晓qPCR的原理和基本操作,仍然浪费时间和精力,而得不到好的结果或对大量的数据不知所措。
  
  服务要求
  
  需提供新鲜或保存完好的细胞(至少5×106)、组织(至少50mg)、血液(300μl)等样本材料;或纯化好的总RNA(OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好)或总DNA(OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好);或反转录好的cDNA不少于30μl(反转录的总RNA完整性好,纯度在1.9-2.1之间);同时提供待测基因序列或登录号。
  
  报告内容
  
  总RNA(或DNA)浓度,电泳图片,扩增曲线,熔解曲线,Ct值以及数据统计分析(可选),实验报告以及剩余引物和模板(信诺金达可保存1个月)