在分子生物学领域，荧光定量PCR技术因其高灵敏度和特异性被广泛应用于基因表达分析、病原体检测等诸多方面。然而，气溶胶污染是该实验过程中一个棘手的问题，它可能导致假阳性结果，严重影响实验的准确性。因此，了解并采取有效的措施来避免气溶胶污染至关重要。
一、气溶胶污染的来源与危害
1.来源
-在加样过程中，移液器的操作可能会产生微小的飞沫，这些飞沫形成气溶胶散布在空气中。例如，当用移液器反复吹打含有核酸模板的溶液时，液体内部的冲击力会使部分液滴逸出。
-反应管开盖的时候，内部的压力变化容易导致样本溅出，进而形成气溶胶。尤其是经过高温变性步骤后的管子，内部蒸汽压力较大，一旦打开，很容易有物质喷出。
-离心操作也不应忽视，如果离心管没有密封好或者转速过快，样品可能泄漏并在离心机腔室内形成气溶胶。
2.危害
-一旦发生气溶胶污染，污染源会在实验室环境中持续存在。后续进行的其他
荧光定量PCR反应，即使使用的试剂和样本本身没有问题，也可能因为这些残留的气溶胶中的核酸片段而被扩增，从而出现假阳性信号。这会误导研究人员对实验结果的判断，浪费大量的时间和精力去排查原因，甚至可能导致整个研究项目的方向错误。
二、预防气溶胶污染的措施
1.优化实验环境布局
-设立专门的荧光定量PCR实验室，分为试剂准备区、样本处理区和扩增区等不同功能区域。各区之间要有明确的物理分隔，人员流动也应遵循单向原则，即从清洁区向污染区移动，避免交叉污染。例如，先在试剂准备区配制好所需的Master Mix等试剂，然后带到样本处理区加入样本，然后进入扩增区进行反应。
-定期对实验室进行清洁和消毒，特别是台面、地面和仪器设备表面。可以使用紫外线照射、75%乙醇擦拭等方法，以去除可能存在的气溶胶颗粒。同时，保持良好的通风换气系统，有助于稀释和排出空气中的污染物。
2.规范实验操作流程
-使用合适的移液器吸头，确保其质量良好且安装正确。在吸取液体时，动作要轻柔缓慢，避免剧烈吹打。对于珍贵的样本或试剂，可以先预润洗吸头，减少挂壁现象带来的误差。
-开盖前，先将反应管短暂离心，使管壁上的液体沉到管底，这样可以降低开盖时液体溅出的风险。另外，尽量采用斜向开盖的方式，让盖子慢慢离开管口，而不是垂直向上掀开。
-在进行多个样本的操作时，要按照一定的顺序，并且每完成一个样本的处理后，及时更换手套，防止将上一个样本的气溶胶带到下一个样本中。
3.加强设备维护管理
-定期检查和维护PCR仪、离心机等关键设备的密封性能。对于离心机，要保证转子安装牢固，离心管放置平衡，并且在离心结束后等待一段时间再打开盖子，以便内部的气溶胶有足够的时间沉降。
-可以考虑使用带有HEPA过滤器的设备，如生物安全柜，它能有效地过滤掉空气中的微粒，包括可能存在的气溶胶。在进行一些高风险的操作，如处理大量未知样本或者疑似感染性样本时，应在生物安全柜内进行。
4.合理设置对照实验
-每次实验都要设置阴性对照，即除了不含模板DNA外，其他成分都相同的反应体系。通过观察阴性对照是否有扩增信号，可以及时发现是否存在气溶胶污染的情况。如果阴性对照出现了预期之外的条带，那就说明可能有污染发生，需要立即查找原因并采取措施加以解决。
-同时，荧光定量PCR还可以根据实际情况设置阳性对照和其他质量控制措施，以确保整个实验过程的可靠性。
