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细胞凋亡检测的详细介绍及操作注意事项
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  细胞凋亡检测是用FITC标记的重组人AnnexinV来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。细胞凋亡检测可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷脂结合蛋白,参与细胞内的信号转导。但仅AnnexinV被报道可以调控一些PKC的活性。
  
  一、细胞凋亡检测:
  
  AnnexinV选择性结合磷脂酰丝氨酸。磷脂酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。磷脂酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而AnnexinV和外翻到细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合后可以阻断磷脂酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。
  
  细胞凋亡检测用带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的AnnexinV,即AnnexinV-FITC,就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。本试剂盒还提供了碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)染色液,碘化丙啶可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现红色荧光。对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性已经丧失,AnnexinV-FITC可以进入到细胞浆内,与位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
  
  二、细胞凋亡检测注意事项:
  
  尽管经测试AnnexinV-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
  
  如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
  
  细胞凋亡检测染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
  
  如果细胞收集过程中使用了胰酶,细胞凋亡检测需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解AnnexinV-FITC,导致染色失败。
  
  荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
  
  用于流式细胞仪检测时,如果发现AnnexinV-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将AnnexinV-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
  
  需自备PBS。
  
  本产品于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  
  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
  

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