免疫荧光（Immunofluorescence）通过特异性荧光抗体结合细胞内的生物靶标抗原，从而实现对靶标分子在细胞内的分布及定位分析。该方法可以对组织块儿、培养细胞或单个细胞进行标记，用于分析蛋白、糖原、及生物/非生物小分子，与此同时，免疫荧光也可以DAPI、Hochest33342等其他非抗体荧光标记染料联合使用。
　　
　　免疫荧光方法中的重要环节：
　　
　　1.冰冻切片制备：建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。
　　
　　2.组织切片固定：切好片风干后立即用冰丙酮等固定液进行固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。
　　
　　3.血清封闭：为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般10-30min。
　　
　　4.一抗孵育条件：在免疫组化反应中重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。具体条件还要摸索。
　　
　　5.二抗孵育条件：二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索，而浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度，切记要避光反应。但在免疫荧光中我们一般先把二抗浓度和孵育时间先定下，然后去摸索一抗浓度和孵育时间。后，荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能后有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时小包装和并进行适当的离心。
　　
　　6.复染：目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。一般常用DAPI复染。
　　
　　7.封片：为了长期保存，我们一般用缓冲甘油等封片，此外还有专门的抗荧光萃灭封片液。避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。
　　
　　 8.切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间和增多次数）尤为重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min×3次，而一抗孵育后的清洗均为5次×5min。