ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
　　
　　ELISA试剂盒的影响因素应选用质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完，剩余的试剂下次用时应先检查是否变质，显色剂如被污染变色将造成全部显色，导致错误结果。
　　
　　ELISA试剂盒注意事项：
　　
　　1．ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
　　
　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
　　
　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
　　
　　4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
　　
　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
　　
　　6．底物请避光保存。
　　
　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
　　
　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
　　
　　9．本试剂不同批号组分不得混用。
　　
　　10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。